Sephadex G75성능이 우수한 일종의 젤 필터 필러입니다. 그것은 덱스 트란과 에피 클로로 히드 린을 가교하여 제조된다. 그것은 많은 양의 하이드 록실기를 갖는 비드 모양의 겔이며, 물과 전해질 용액에서 팽창하기 쉽다. 이 화합물의 최대 제외 한계는 80000이고, 특정 붓기 정도는 건식 수지 및 작동 조건의 양에 따라 다릅니다. 예를 들어, 특정 조건에서, 건조 수지의 붓기 정도는 519ml/g 일 수있다. 작동 pH 범위가 6.210 (일부 제품의 경우 5.210) 인 경우 화합물은 안정적으로 유지 될 수 있습니다. 성능과 안정성을 유지하기 위해 430도 (또는 425도)의 온도 범위에서 실온에서 냉각하고 멀리 떨어진 곳에 보관하는 것이 좋습니다. 이 물질은 80000보다 큰 분자량을 가진 큰 생체 분자에 특히 적합합니다. 주로 이러한 큰 생체 분자의 탈염 및 완충제 교체에 사용됩니다. 하나의 - 단계 작동을 통해 빠르게 탈살하고 오염 물질을 제거하고 분자를 새로운 완충액으로 전달할 수 있습니다. 탈염 및 완충제 교체 외에도, Sephadex G-75는 또한 큰 생체 분자의 정제 과정에 적합하다.
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Sephadex G75생화학 및 분자 생물학의 분리 및 정제 기술에 주로 사용되는 덱스 트란 겔입니다. 이 물질의 주요 용도는 다음과 같습니다.
탈염 과정에서, 그것은 생물학적 분자 용액에서 염 (보통 소분자 무기 염)을 효과적으로 제거 할 수있다. 이 물질의 장점은 생체 분자의 활성을 변화시키지 않으면 서 작동하기 쉽고 빠르게 작동하며 효과적인 탈염을 달성 할 수 있다는 것입니다. 또한, 우수한 화학적 안정성 및 생체 적합성으로 인해, 단백질, 펩티드, 핵산 등을 포함한 다양한 생체 분자의 탈염 처리에 적합합니다. 실제 응용 분야에서 겔 탈염은 일반적으로 이온 교환, 친 화성 크로마토 그래피 등과 같은 다른 정제 기술 및 생물 분리의 분리와 같은 다른 정제 기술과 결합된다.
이 물질은 특히 생화학 및 분자 생물학 분야에서 완충제 교체에 광범위한 응용 분야를 갖는다. 예를 들어, 단백질 정제 과정에서, 때로는 안정성 및 활성에 더 적합한 단백질 시스템에서 다른 완충 시스템으로 단백질을 전달해야한다. 그리고이 물질은이 목표를 효과적으로 달성 할 수 있습니다. 핵산 추출 과정에서, 핵산을 불순물 및 염을 함유하는 용액으로부터 분리하고 후속 작업을 위해 새로운 완충제로 옮길 필요가있다. 이 시나리오에도 적용됩니다. 세포 배양 동안, 때때로 세포 성장 및 활성을 유지하기 위해 배양 배지 또는 완충제를 대체해야한다. 오래된 배양 배지 또는 완충제에서 유해 물질을 제거하고 새로운 배양 배지 또는 완충제를 도입하는 데 사용될 수 있습니다.
분자 체로
단백질 연구 및 준비 과정에서 일반적으로 표적 단백질을 복잡한 혼합물로부터 분리해야합니다. 그것은 크기에 따라 단백질을 분리하여 단백질 정제를 달성 할 수 있습니다. 용리액의 이온 강도 및 pH 값과 같은 용리 조건을 조정함으로써, 단백질의 분리 효율은 추가로 최적화 될 수있다. 단백질 및 핵산 외에도, 다당류, 효소, 항체 등과 같은 다른 생체 분자의 분리 및 정제에도 사용될 수 있습니다. 겔에서 이러한 바이오 크로 몰레 큘의 운동 속도는 효과적인 분리를 달성하기 위해 그들의 크기와 형태에 의존합니다. 이 물질은 분자량 측정을위한 도구로 직접 사용되지 않지만, 분자량 측정에서 보조 도구 역할을 할 수 있습니다.
단백질 정제 과정에서, 일반적으로 단백질 용액으로부터 소금, 소분자 대사 산물, 결합되지 않은 리간드 등과 같은 소분자 불순물을 제거해야한다. 이 물질은 단백질 용액으로부터 이러한 소분자 불순물을 효과적으로 제거하여 단백질의 순도를 개선 할 수있다. 그것의 분자 체 효과는 이들 소분자 불순물을 효과적으로 제거하여 순수한 핵산을 생성 할 수있게한다. 효소 제제는 전형적으로 미지의 기질, 억제제, 대사 산물 등과 같은 소분자 불순물을 포함합니다. 이러한 불순물은 효소의 활성 및 안정성에 영향을 줄 수 있습니다. 물질의 겔 여과를 통해, 이들 소분자 불순물을 효과적으로 제거 할 수 있고 효소 제조의 순도가 개선 될 수있다. 단백질 및 핵산 외에도
세포 간 신호 전달을 시뮬레이션합니다
세포 간 신호 전달은 세포 인식, 신호 전환 및 생리적 반응과 같은 복잡한 프로세스를 포함하는 핵심 생활 활동 메커니즘입니다. 전통적인 연구는 종종 라이브 셀 모델에 의존하지만 복잡한 신호 네트워크 및 여러 간섭 요인과 같은 제한 사항이 있습니다.Sephadex G75클래식 덱스 트란 겔 여과 매체입니다. 다공성 구조 및 분자 체 효과는 세포 간 신호 전달을 시뮬레이션하기위한 고유 한 물리적 모델을 제공한다.
Sephadex G-75를 사용한 세포 간 신호 전달 시뮬레이션을위한 물리적 모델
세포 간 갭 접합의 시뮬레이션
갭 접합은 링커를 통해 인접한 세포 사이에 형성된 친수성 채널이며, 분자량으로 소분자를 자유롭게 교환 할 수 있습니다.<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
신호 분자의 구배 형성 : 상이한 농도의 신호 분자 (예 : CAMP, Ca ²+)가 겔 컬럼에 로딩된다. 겔 기공에서 소분자의 확산 속도의 차이는 분자 체 효과를 통해 관찰 될 수 있으며, 세포 사이의 화학 신호의 구배 전달은 시뮬레이션 될 수있다.
상승적 반응 시뮬레이션 : 2 개의 상호 작용 분자 (예 : 리간드 및 수용체)는 각각 겔 컬럼의 양쪽 끝에 로딩되며, 이들의 결합 동역학은 용리시 차이를 통해 분석되어 세포 간 직접 접촉 통신에서 분자 인식 과정을 시뮬레이션한다.
막 표면에서 분자 접촉의 시뮬레이션
막 표면 분자 사이의 통신은 세포막 표면 단백질의 특이 적 상호 작용에 의존한다. Sephadex G-75는 기능 수정을 통해이 프로세스를 시뮬레이션 할 수 있습니다.
수용체 리간드 결합 실험 : 비 오티 닐화 된 수용체 단백질 (예 : EGFR)은 겔 입자의 표면에 고정되어, 형광 표지 된 리간드 (예 : EGF)는 스트렙 타비 딘 비오틴 시스템을 통해 포획되며, 결합 신호 강도는 형광 검출기로 모니터링되어 수용체 라이트 친화성을 정량화한다.
경쟁 결합 분석 : 겔 컬럼에서 수용체 리간드 복합체를 예압하고, 상이한 농도 (예 : 항 EGFR 항체)의 경쟁 억제제를 추가하고, 용리 피크 이동을 통해 억제 상수 (KI)를 계산하며 세포 신호 경로에서 약물의 중재 효과를 시뮬레이션한다.
화학 신호 전송 시뮬레이션
화학 신호 전달은 체액 또는 세포 외 매트릭스를 통해 세포를 통해 세포에 의해 분비 된 화학 신호 분자 (예 : 호르몬 및 사이토 카인)의 확산에 의존한다. Sephadex g - 75는 3 차원 확산 모델을 구성 할 수 있습니다.
파라 크린 시스템 시뮬레이션 : 분비 세포 (예 : 대 식세포) 및 표적 세포 (예 : T 세포)는 각각 겔 미소 구체에 캡슐화되며, 표적 세포 (예 : CD69 발현)의 활성화 상태는 CO 배양을 통해 관찰되어 파라크린 신호의 국소 효과를 시뮬레이션한다.
내분비 신호 전달 : 형광 표지 된 호르몬 (예 : 인슐린)은 겔 컬럼에로드되며 겔 기공과의 상호 작용은 용출 시간을 통해 분석되며, 혈액 순환에서 호르몬의 절반 - 수명은 수학 모델을 결합하여 예측됩니다.
세포 신호 연구에서 Sephadex G-75의 적용 사례
적혈구 신호 전달 및 인테그린 기능에 대한 연구
혈소판 접착 수용체 인테그린 IIB 3은 혈소판 표면에서 가장 풍부한 당 단백질이며 지혈 및 혈전 형성에 중요합니다. Sephadex G-75의 사용을 연구하여 혈소판과 피하 콜라겐 사이의 상호 작용을 시뮬레이션하십시오.
인테그린 활성화 모델 : 정제 된 인테그린 IIB 3을 겔 입자의 표면에 고정시키고, 가용성 피브리노겐 (FG)을 리간드로 첨가 하였다. 결합 동역학은 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해 검출되었다. 활성화 후 FG에 대한 인테그린의 친화력이 상당히 개선 된 것으로 밝혀졌다 (KD는 μm에서 NM으로 감소).
항 혈소판 약물 스크리닝 : 겔 컬럼에서 예압 인테그린 FG 복합체, 상이한 농도의 항 혈소판 약물을 첨가하고, 티로 피바 인과 같은 항자계 약물을 첨가하고, 용리 피크 변위에 의해 인테그린 활성에 대한 약물의 억제율을 계산하고, 새로운 항 혈전 약물의 발달을위한 높은 - 처리량 스크린 플랫폼을 제공한다.
종양 관련 신호 전달 경로의 조절
종양 세포는 MAPK 및 PI3K/AKT와 같은 신호 전달 경로의 비정상적인 활성화를 통해 증식 및 전이를 촉진합니다. Sephadex G-75는 신호 전달 경로에서 주요 단백질을 분리하고 정제하는 데 사용될 수 있습니다.
EGFR 신호 경로 연구 : EGFR 단백질을 Sephadex G-75 겔 여과에 의해 정제하고, 인산화 상태를 질량 분석법으로 분석 하였다. EGF 자극 후 EGFR의 Y1068 및 Y1086 부위의 인산화 수준은 하류 ERK1/2 및 AKT 신호를 활성화시켰다.
약물 저항성 메커니즘 분석 : 약물 - 내성 위암 세포 (SGC7901/VCR)에서, UHRF1 단백질은 Sephadex G-75에 의해 분리되고 정제되었으며, 그의 과발현 관련 단백질의 활성화를 억제하는 것으로 밝혀졌다 (예 : Caspase-3), IC 3-5 시간).
면역 세포 신호 전달 및 다당류 조절
적색 조류 다당류 (BFP)는 대 식세포에서 NF - κB 및 MAPK 신호 전달 경로를 활성화시킴으로써 면역 반응을 향상시킨다. Sephadex G-75를 사용하여 BFP 및 그 성분의 분리 및 정제에 대한 연구 : Sephadex G-75 :
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95%는 DEAE 셀룰로오스 52 이온 교환 크로마토 그래피와 결합 된 Sephadex G-75 겔 여과에 의해 수득되었고, 분자량은 각각 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa 및 45kDa였다.
신호 경로 활성화 : RAW264.7 대 식세포 모델에서, BFP와 그 성분은 NO 및 TNF -의 분비를 상당히 유도 할 수 있으며, 그 메커니즘은 NF - κ B 핵 전위 및 JNK, ERK 및 P38 MAPK의 인산화를 포함한다. Sephadex g - 75로 분리 된 정제 된 성분은 F1이 NF - κ B 및 MAPK 경로에 가장 강한 활성화 효과를 나타냈다 (2.5 배, TNF- 분비를 3 회 증가).
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