3xflag 펩티드생의학 연구에서 단백질 발현 및 정제 과정에 널리 사용되는 중요한 펩티드 마커 서열이다. 분자식 C120H169N31O49S, CAS 402750-12-3. 23 개의 아미노산으로 구성된이 서열은 3 개의 반복 된 ASP Tyr Lys XAA XAA ASP 모티프를 함유하여 특정 구조적 특징을 제공합니다. 특정 용매에서 용해도가 우수합니다. 예를 들어, DMSO에서는 용해도가 높아 솔루션의 작동 및 실험에 편리합니다. 또한 가벼운 가열을 통해 물에서 양호한 용해 효과를 얻을 수 있습니다. 또한 몇 가지 특별한 속성이 있습니다. 예를 들어, 항원 성과 반응성이 우수하며 특정 항 플래그 항체에 결합 할 수 있습니다. 이 결합 능력은 면역 침전과 같은 실험에 널리 적용 할 수있게한다. 항 - 플래그 항체에 경쟁적으로 결합함으로써, 항 플래그 항체에 결합하는 플래그 융합 발현 단백질은 면역 침전 동안 용리시켜 국소화, 검출 및 표적 단백질의 정제를 달성 할 수있다.
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맞춤형 병 캡 및 코르크 :
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화학식 |
C120H169N31O49S |
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정확한 질량 |
2860 |
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분자량 |
2862 |
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m/z |
2861 (100.0%), 2860 (77.0%), 2862 (32.9%), 2862 (31.4%), 2863 (22.1%), 2862 (11.5%), 2863 (10.1%), 2861 (8.8%), 2864 (8.1%), 2862 (7.8%), 2863 (7.4%), 2863 (5.3%), 2863 (4.5%), 2862 (3.5%), 2864 (3.3%), 2864 (3.2%), 2865 (2.2%), 2865 (2.1%), 2864 (2.1%), 2862 (1.9%), 2862 (1.9%), 2861 (1.5%), 2864 (1.5%), 2861 (1.4%), 2864 (1.4%), 2863 (1.2%), 2864 (1.2%) |
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원소 분석 |
C, 50.36; H, 5.95; N, 15.17; O, 27.39; S, 1.12 |
3xflag 펩티드서열 dykdhdgdykdhdidykddddk를 갖는 8 개의 아미노산으로 구성된 단백질 연구에 사용되는 태그이다. 그것의 주요 기능은 단백질 발현 및 정제의 마커 역할을하여 연구에서 편리하고 효율적인 수단을 제공하는 것입니다.
1. 친화력 정제 :
그것은 단백질 정제를위한 라벨로 사용될 수 있으며, 항 플래그 항체와의 높은 친화력을 통해 표적 단백질을 쉽게 정제 할 수있다. 일반적으로, 표적 단백질은 3x 플래그 펩티드를 함유하는 발현 벡터를 갖는 세포로 형질 감염된 다음, 항 -FLAG 항체를 사용하여 친 화성에 의해 정제하여 고순도 표적 단백질을 빠르고 효율적으로 수득한다.
2. 면역 학적 검사 :
면역 원성이 높기 때문에 단백질 발현 및 국소화를 검출하는 데 사용될 수 있습니다. 특정 항 플래그 항체를 이용함으로써, 면역 블 롯팅 및 면역 형광 염색과 같은 실험 기술이 표적 단백질의 발현 수준 및 분포를 빠르고 정확하게 검출하기 위해 수행 될 수있다.
3. 클론 필터링 :
단백질 클론 스크리닝의 편의성에도 사용될 수 있습니다. 단백질 발현 벡터의 구성 과정에서, 표적 단백질의 유전자 서열을3xflag 펩티드서열은 면역 검출 및 기타 방법을 통해 표적 단백질로 양성 클론의 스크리닝을 촉진하여 단백질 기능 연구 과정을 가속화시킬 수있다.
4. 면역 침전 :
단백질 면역 침전 실험에도 사용될 수 있습니다. 3X 플래그 펩티드 태그를 항 플래그 항체에 함유 한 다음 단백질 A/G 아가 로스 또는 자기 비드와 같은 흡착 물질을 사용하여, 표적 단백질 및 상호 작용 파트너를 세포 추출물로부터 선택적으로 침전시켜 단백질 상호 작용 네트워크를 연구 할 수있다.
5. 약물 선별 :
또한 약물 스크리닝 연구에도 사용될 수 있습니다. 3X 플래그 펩티드 태그를 관심있는 단백질과 결합함으로써, 단백질의 고 처리량 스크리닝이 달성 될 수있다. 이 스크리닝 방법은 새로운 약물 표적을 발견하고 약물 단백질 상호 작용을 평가하는 데 사용될 수 있습니다.
6. 단백질 기능 연구 :
라벨의 도입은 단백질의 자연 구조 및 기능에 크게 영향을 미치지 않으므로, 따라서 단백질의 생물학적 기능, 세포 내 위치, 상호 작용 및 신호 전달을 연구하는데 사용될 수있다. 3X 플래그 펩티드 태그를 도입함으로써, 단백질의 생물학적 특성에 대한 심층적 인 연구를 수행 할 수 있으며, 이는 세포 생물학 및 생리학에서 작용의 메커니즘을 밝히는 데 도움이됩니다.
3xflag 펩티드서열 dykdhdgdykdhdidykddddk와 함께 8 개의 아미노산을 함유하는 펩티드이다. 그것은 표적 단백질의 편리한 정제, 검출 및 연구를위한 단백질 태그로 일반적으로 사용됩니다. 생합성 과정에서 화학적 합성 또는 유전자 공학 방법을 통해 제조 될 수 있습니다. 다음은 유전자 공학 방법의 자세한 단계입니다.
1. 유전자 설계 및 합성 :
첫째, 3x 플래그 펩티드 서열을 함유하는 인공 유전자를 설계해야한다. 이 유전자는 3X 플래그 펩티드 서열뿐만 아니라 적절한 프로모터, 터미네이터 및 선택 마커 (예 : 항생제 내성 유전자)를 포함해야한다. 유전자의 설계는 표적 숙주의 특성과 발현 요구를 고려해야한다.
2. 유전자 클로닝 :
다음으로, 설계된 인공 유전자는 적절한 발현 벡터로 클로닝 될 것이다. 일반적으로 사용되는 벡터는 플라스미드, 바이러스 벡터 등을 포함합니다. 클로닝 과정에는 일반적으로 다음 단계가 포함됩니다.
-PCR 증폭 : 중합 효소 연쇄 반응 (PCR)을 사용하여 주형 DNA로부터 표적 유전자 서열을 증폭시킨다.
-탈량 및 연결 : PCR 생성물은 제한 엔도 뉴 클레아 제를 사용하여 발현 벡터로 소화 된 다음 DNA 리가 제에 의해 함께 연결됩니다.
-변형 : 연결된 발현 벡터를 대장균과 같은 박테리아 숙주로 변환하여 재조합 플라스미드를 형성한다.
-식별 : 재조합 플라스미드는 PCR, 효소 소화, DNA 시퀀싱 및 기타 방법을 통해 표적 유전자가 벡터로 성공적으로 클로닝되었음을 확인하기 위해 확인되었다.
3. 발현 표적 단백질 :
구조화 된 발현 벡터를 포유 동물 세포, 효모 세포, 곤충 세포 등과 같은 표적 숙주 세포로 형질 감염시킨다. 세포 내에서, 발현 벡터를 mRNA로 전사 한 다음 단백질 . 3 x 플래그 펩티드로 변환된다.
4. 단백질 추출 :
형질 감염된 세포를 수집하고 세포 조각화, 원심 분리 및 기타 처리를 수행하여 총 단백질 추출물을 얻습니다.
5. 정제 된 단백질 :
면역 침전 및 친 화성 크로마토 그래피와 같은 친화력 정제 기술을 사용하여, 3x 플래그 펩티드 태그를 함유하는 표적 단백질을 총 추출물로부터 정제 하였다. 이것은 일반적으로 3x 플래그 펩티드를 함유하는 단백질에 항 플래그 항체를 결합시킨 다음 친화력 크로마토 그래피 컬럼 또는 자기 비드를 사용하여 분리하는 것을 포함한다.
6. 단백질 식별 :
정제 된 단백질은 순도와 무결성을 보장하기 위해 SDS-PAGE 겔 전기 영동, 면역 블 롯팅, 질량 분석법 및 기타 기술에 의해 확인되고 정량화되었다.
부작용
생의학 연구 및 단백질 관련 실험에서 태그 펩티드는 중요한 역할을합니다. 그들은 연구자들이 표적 단백질을 정화, 탐지 및 찾는 데 도움을 줄 수 있으며 단백질 과학의 발달을 크게 촉진합니다.3xflag 펩티드3 개의 반복 된 플래그 태그 시퀀스로 구성된 일반적이고 널리 사용되는 태그 펩티드입니다. 플래그 태그는 원래 Hopp et al. 1988 년에, 나중에 선호도와 특이성이 높고 특정 항체에 결합하여 후속 분리 및 식별을 촉진 할 수있는 3xFlag와 같은 변이체로 발전했습니다. 3XFLAG 펩티드는 다른 생물학적 제제와 마찬가지로 실험에서 많은 편의를 가져 왔지만 일부 부작용을 일으킬 수도 있습니다.
면역 관련 부작용
면역 원성
면역 원성은 신체의 면역계를 자극하여 면역 반응을 생성하는 물질의 능력을 말합니다. . 3 Xflag 펩티드는 외인성 펩티드 세그먼트로서 신체의 면역계에 의해 "자기"성분으로 인식되어 면역 반응을 유발할 수 있습니다. 3xFlag 서열은 비교적 짧지 만, 어떤 경우에는 여전히 B 세포 및 T 세포를 활성화시켜 항체의 생성을 초래할 수있다. 이들 항체는 유리 3xFlag 펩티드에 결합 할뿐만 아니라 융합 단백질의 정상적인 기능 및 분포에 영향을 미치는 3xFLAG 태그를 발현하는 융합 단백질을 인식하고 결합 할 수있다.
알레르기 반응
알레르기 반응은 면역계가 특정 알레르겐에 지나치게 민감한 면역 반응입니다. 개별 개인은 실험 또는 치료를 위해 3XFLAG 펩티드를 사용할 때 알레르기 반응을 경험할 수 있습니다. 알레르기 반응의 증상의 심각성은 다양합니다. 가벼운 사례는 가려움증, 발진 및 홍반과 같은 국소 증상을 나타낼 수 있지만, 심한 사례는 혈압의 급격한 감소, 호흡 곤란 및 의식 상실로 특징 지어지는 아나필락시스 충격과 같은 전신 알레르기 반응을 유발하여 생명 안전에 심각한 위협을 가할 수 있습니다.
알레르기 반응
알레르기 반응의 메커니즘은 주로 면역계에서 IgE 항체와 관련이있다. 신체가 처음 3xflag 펩티드와 접촉 할 때, 면역계는 그것을 알레르겐으로 인식하고 B 세포를 자극하여 특정 IgE 항체를 생성합니다. 이들 IgE 항체는 비만 세포 및 호산구의 표면에 부착된다. 신체가 다시 3XFLAG 펩티드와 접촉하면, 세포 표면의 IgE 항체에 결합하여, 비만 세포 및 호산구를 트리거하여 히스타민 및 백혈구와 같은 생물 활성 매개체를 방출하여 알레르기 증상의 발생을 초래합니다.
자가 면역 질환의 위험
3XFLAG 펩티드에 장기 또는 반복 노출되면자가 면역 질환이 발생할 위험이 증가 할 수 있습니다. 자가 면역 질환은 신체의 면역 체계가 자신의 조직 및 기관을 실수로 공격하여 조직 손상 및 기능적 손상을 초래하는 질병의 유형을 지칭합니다. . 3 XFLAG 펩티드는 분자 시뮬레이션 메카니즘을 통한 상호적 인 반응성 메커니즘을 통해 교차 반응성 항체 및 T 세포를 생성하도록 면역계를 유도 할 수 있습니다. 이들 면역 세포 및 항체는 외래 3xFlag 펩티드를 공격 할뿐만 아니라 신체의 정상 조직을 부주의하게 손상시켜자가 면역 질환을 유발한다. 예를 들어, 전신성 홍 반성 루푸스 및 류마티스 관절염과 같은 특정자가 면역 질환은 외인성 물질에 의해 유도 된자가 면역 반응과 관련이있을 수 있습니다. 현재 3xFlag 펩티드가자가 면역 질환을 직접 일으킨다는 명확한 증거는 없지만, 이러한 잠재적 위험은 무시할 수 없습니다.
세포 기능에 미치는 영향
세포 독성
일부 실험 연구에서, 고농도의 3xFlag 펩티드는 세포에 독성 효과를 가질 수있는 것으로 밝혀졌다. 세포 독성의 징후는 세포 형태의 변화, 세포막 완전성의 파괴, 세포 내 효소 활성의 변화 및 세포 증식의 억제를 포함한다. 그것의 작용 메커니즘은 3xFlag 펩티드와 세포막 사이의 상호 작용과 관련 될 수있다. 3XFLAG 펩티드의 강한 음전하로 인해, 정전기 상호 작용을 통해 세포막의 양으로 하전 된 성분에 결합하여 세포막의 투과성 및 유동성을 변경하여 세포 내 물질의 누출 또는 외부로부터 유해 물질의 유도를 유도하여 세포의 정상적인 생리 학적 기능에 영향을 미칠 수있다. 또한, 3XFLAG 펩티드는 또한 세포 내부로 들어가 신호 전달 경로, 단백질 합성 및 기타 과정을 방해하여 세포 손상을 추가로 악화시킬 수있다.
세포 신호 전달 경로에 미치는 영향
3XFLAG 펩티드는 세포 내 신호 전달 경로를 방해하고 세포의 정상적인 생리 학적 활성에 영향을 줄 수있다. 세포 신호 전달 경로는 세포 성장, 분화 및 아 pop 토 시스 . 3 Xflag 펩티드와 같은 중요한 과정을 조절하는 세포 세포가 외부 자극에 반응하는 일련의 분자 사건에 대한 집단적 용어이다. 예를 들어, 세포 표면의 수용체에 결합하여 수용체에 천연 리간드의 결합을 경쟁적으로 억제하고 신호 전달을 차단하고; 대안 적으로, 이는 신호 전달 및 증폭을 방해하여 단백질 인산화, 탈 인산화 및 기타 변형 과정에 영향을 미치는 세포에 들어가 신호 전달 단백질에 결합 할 수있다. 세포 신호 전달 경로와의 이러한 간섭은 세포 증식, 분화 및 아 pop 토 시스와 같은 과정에 영향을 미치며, 이는 조직 및 기관의 정상적인 발달 및 기능에 부정적인 영향을 줄 수있다.
세포 대사에 미치는 영향
세포 대사는 세포 내에서 발생하는 일련의 화학 반응에 대한 일반적인 용어이며, 세포 생명 활성에 대한 에너지 및 물질적 기초를 제공 . 3 XFLAG 펩티드는 세포 대사 과정에 영향을 미치고, 세포 에너지 생산 및 물질 합성을 방해 할 수있다. 예를 들어, 세포에서 호기성 호흡 및 에너지 생산을위한 주요 부위 인 미토콘드리아의 기능에 영향을 줄 수있다. . 3 XFLAG 펩티드는 미토콘드리아 막 투과성 및 막에서 단백질 또는 지질과의 상호 작용에 의해 미토콘드리아 막 투과성 및 잠재력을 변화시킬 수 있으며, 미토콘드리아 호흡기 기능에 영향을 미치고, 합성 에너지 공급에 영향을 미치고, 불안정한 세포 세포 에너지 공급에 영향을 미칠 수있다. 또한, 3XFLAG 펩티드는 또한 포도당 대사 및 지질 대사와 같은 세포 내 과정을 방해하여 세포의 물질 합성 및 분해의 균형에 영향을 미치며 세포의 정상적인 생리 학적 기능에 부정적인 영향을 미칩니다.
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